Определение резистентности вич

Патрик Браун, Ева Вольф Появление резистентных (устойчивых) штаммов ВИЧ — одна из главных причин неэффектив­ности антиретровирусной терапии. Если возникает устойчивость к препаратам сразу несколь­ких групп, возможности выбора препаратов для следующей схемы терапии значительно сокра­щаются. Однако сейчас появилась возможность назначать эффективные резервные схемы терапии, включающие ИП или ННИОТ второго поколения, у которых другие профили рези­стентности, или препараты новых групп, например, ингибиторы проникновения или ингиби­торы интегразы. При заменах терапии по причине развития резистентности бывает полезным восстановление чувствительности вируса к препаратам (ресенсибилизация).

Быстрое появление резистентных штаммов ВИЧ обусловлено высокой скоростью репликации ВИЧ — ежедневно образуется почти 10 млн новых вирусных частиц (Perelson, 1996) — а также очень большой частотой ошибок репликации, совершаемых обратной транскриптазой ВИЧ. Это приводит к высокой частоте появления мутаций и постоянному образованию новых штам­мов вируса даже в отсутствие лечения. На фоне приема антиретровирусных препаратов про­исходит селективный отбор резистентных штаммов, и они начинают преобладать в общей по­пуляции вируса (Drake, 1993).

В этой главе при обсуждении генотипической резистентности вируса рассказывается большей частью о мутациях резистентности и их сочетаниях (так называемых «профилях резистентно­сти»), возникающих в генах, кодирующих обратную транскриптазу, протеазу, интегразу и белки наружной оболочки, на фоне селективного воздействия антиретровирусных препаратов. Дается общее представление о правилах интерпретации результатов генотипирования. Большинство данных получено на основании обследования пациентов с вирусами подтипа В (которые в структуре глобальной эпидемии ВИЧ-1-инфекции составляют лишь приблизительно 10%).

Од­нако вирусы не-В-подтипов тоже изучались. У разных подтипов вируса механизмы развития резистентности и профили резистентности могут отличаться (Snoeck, 2006). Методы определения резистентности вируса Для оценки устойчивости (или чувствительности) ВИЧ к отдельным антиретровирусным пре­паратам существует два основных метода — фенотипирование и генотипирование (Wilson, 2003).

Системы для генотипирования, одобренные FDA: HIV-1 TruGene™ (Siemens Healthcare Diagnostics) ViroSeq™/ABI Prism® 3100 Genetic Analyzer (Abbott Molecular/Applera Corporation ofApplied Biosystems and Celera) Другие системы для генотипирования, например, GeneSeq™ (Monogram Biosciences), разраба­тываются в лабораториях компаний-производителей и применяются в клинических исследо­ваниях. Стандартные методы генотипирования (основанные на изучении популяции вируса в целом) выявляют мутантные штаммы, составляющие не менее 20% от общей популяции вируса. В не­которых лабораториях применяются сверхчувствительные методы (аллелеспецифичная ПЦР в реальном времени, секвенирование отдельных геномов), которые выявляют мутантные штаммы, составляющие <0,1—5% от общей популяции вируса.

Клиническое значение «минор­ных» штаммов пока не установлено. Системы для фенотипирования включают: Antivirogram™ (Virco) PhenoSense™ (Monogram Biosciences) Phenoscript™ (Viralliance) К недостаткам фенотипирования следует отнести большие затраты времени на проведение ис­следования и высокую стоимость. Стоимость исследования колеблется в зависимости от лабо­ратории и используемой системы и составляет от 350 до 450 евро для генотипирования и при­мерно вдвое больше для фенотипирования.

. Применение обоих методов ограничивается требованиями к минимальному уровню виремии: уровень вирусной нагрузки менее 500—1000 копий/мл зачастую недостаточен для определения резистентности вируса.

Фенотипирование

При фенотипировании получают количественную оценку непосредственной чувствительности вируса к антиретровирусным препаратам. При этом сравнивают скорость репликации выде­ленных от пациента штаммов ВИЧ в клеточной культуре в присутствии разных концентраций антиретровирусных препаратов со скоростью репликации штамма дикого типа (контрольного штамма) в присутствии тех же концентраций антиретровирусных препаратов. Для каждого препарата определяют показатель IC50 (концентрацию препарата, которая подав­ляет репликацию вируса в клеточной культуре на 50%). Затем для определения чувствительно­сти вируса вычисляют отношение IC50 для исследуемого штамма к IC50 для контрольного штамма (дикого типа) и сравнивают полученную величину (коэффициент резистентности) с пороговой. Если полученная величина меньше пороговой, штамм считают чувствительным, если больше — устойчивым. Пороговая величина показывает, во сколько раз IC50 для исследуе­мого штамма может превышать IC50 для дикого штамма, чтобы вирус все еще считался чувстви­тельным к препарату. Поэтому определение пороговых величин очень важно для интерпретации результатов. На сегодняшний день таких пороговых величин три. Техническая пороговая величина Учитывает вариабельность получаемых результатов, обусловлен­ную методологическими особенностями проведения исследования. Биологическая пороговая величина Отражает вариабельность штаммов дикого типа, выделяемых от разных пациентов, ранее не получавших АРТ.

Если IC50 для исследуемого штамма ниже био­логической пороговой величины, вероятность вирусологического эффекта очень высока. Од­нако если IC50 превышает биологическую пороговую величину, то предсказать эффективность препарата невозможно. И наоборот, Клиническая пороговая величина Указывает на уровни IC50, при которых подавление репликации вируса еще возможно.

В бланках результатов фенотипирования, проведенных с помощью систем vircoType™ и PhenoSense, указываются нижняя и верхняя клинические пороговые величины. Нижняя кли­ническая пороговая величина соответствует коэффициенту резистентности (изменению IC50), который свидетельствует о незначительном снижении чувствительности вируса к препарату. Если коэффициент резистентности превышает верхнюю клиническую пороговую величину, то вирус считается резистентным к препарату.

Если коэффициент резистентности находится в диа­пазоне клинической чувствительности, то это говорит о частичном снижении чувствительности вируса к препарату (или о частичной резистентности). Вследствие ограниченного клинического опыта диапазоны клинической чувствительности для недавно одобренных к применению пре­паратов не установлены.

Генотипирование

При генотипировании выявляют известные мутации, вызывающие резистентность вируса. Для этого применяются методы прямого секвенирования амплифицированного генома ВИЧ, а также методы гибридизации с олигонуклеотидами дикого или мутантного штамма вируса. Важ­ные сведения, которые могут повлиять на решения относительно дальнейшего лечения, полу­чают при секвенировании гена Pol, Кодирующего вирусные ферменты протеазу, обратную транс­криптазу и интегразу, а также при секвенировании гена Env, Кодирующего гликопротеины наружной оболочки вируса, gp41 и gp120.

Интерпретация результатов генотипирования (сочетания выявленных мутаций резистентности) основывается на корреляции генотипа, фенотипа и клинической эффективности. Данные о такой корреляции получают из исследований In vitro, Клинических исследований, клинических наблюдений и так называемых «двойных» исследований, когда штаммы с известными (вы­явленными генотипическим методом) мутациями проверяют на фенотипическую резистент­ность.

Похожие записи:

  • Криптоспоридиоз Криптоспоридиоз — паразитарное кишечное заболевание с фекально-оральным путем пере­дачи. Основной возбудитель — простейшее Cryptosporidium parvum (выделяют […]
  • Многоочаговая болезнь кастлемана (ангиофолликулярная гиперплазия лимфоузлов) Многоочаговая болезнь Кастлемана (МБК) — редкое заболевание, которое опасно не только плохим прогнозом при ВИЧ-инфекции, но и тем, что многие клиницисты и […]
  • Система hla и иммунный ответ на вич Лимфоциты CD8 распознают «свой» антиген (пептидный фрагмент) в комплексе с молекулами HLA класса I на поверхности антигенпредставляющей клетки, а […]
  • Блокаторы корецепторов Предисловие Для проникновения в клетку-мишень ВИЧ требуются не только рецепторы CD4, но и так на­зываемые «корецепторы» (вспомогательные […]
  • Изоспориаз Isospora belli — повсеместно распространенный кишечный паразит. В Европе изоспориаз встре­чается редко, но это заболевание является большой проблемой в […]

Сайт Здоровье родных и близких находят по следующим фразам:

Оставить отзыв



Рейтинг@Mail.ru